Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现人体内自身特异性到经常出现1改型肝炎临床呕吐的实质性不下在学龄前时期就有良好的说明了，多个人体内自身特异性乙改型肝炎的学龄前之中有70%在血清转换后10年内复发肝炎，而随访15年的学龄前这一数目减低到84%。比起之下，占临床1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的发病机制还没给与充分的研究者。

越来越多的人开始用于分期控制系统来定义1改型肝炎的实质性：母体在经常出现多种人体内自身特异性时进入第1前期，经常出现血糖异常时进入第2前期，经常出现呕吐时进入第3前期。一些多发人体内自身特异性乙改型肝炎的母体，在1期和2期，实质性较更慢，并发展为发病的1改型肝炎。我们之前说明了了一举例来说在首次检验到多种人体内自身特异性取样后据估计10年无肝炎的极更慢实质性者，这举例来说高血压数量少，但不同之处更为明确。随后，我们发现人体内自身特异性特异性CD8+T细胞膜催化在实质性缓更慢的高血压之中基本不假定，但在近期发病和长期以来假定的肝炎高血压之中很更易检验到。这也许声称，与实质性高血压比起，这些高血压免疫催化的恒定增强。

现代研究者声称，尽管恒定性T细胞膜(Treg)数量情况下，但肝炎高血压假定一些功能缺陷，其之中包括对IL-2的催化灵活性增大。此外，肝炎高血压之中的effectCD4+T细胞膜也许对恒定更具抵抗性，体现为effectT细胞膜的抑制作用消散，自然激发的Treg和体外激发的抑制Treg，以及特异性年中的CD4+T细胞膜之中IL-2催化消散。本研究者的用意是说明了了CD4+恒定性T细胞膜(Treg)在一小群极缓更慢实质性者之中的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁一般而言胃癌的高血压亲人之中检查1改型肝炎的危险因素。我们之前说明了了长期以来缓更慢实质性者的不同之处，他们保持稳定多重人体内自身特异性乙改型肝炎多达10年，但没经常出现肝炎的临床呕吐，更慢性或非顺利进行性免疫。随后，10名再次保持稳定无肝炎并愿意提供大量血清取样的缓更慢实质性者纳入T和B细胞膜功能控制系统性。在迄今的研究者之中，8名更慢实质性者(SP举例来说)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的人体内自身特异性乙改型肝炎。所有的行动者都东南面1改型肝炎实质性的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身特异性对某些特异性的乙改型肝炎催化，然而，一名高血压现在东南面2期据估计6年，但没经常出现临床呕吐，一名高血压被诊疗为肝炎，该受试者72岁，在采自实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据控制系统性之中对该小分子顺利进行了单独评估。分离出来外周血单个质子细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜精和T细胞膜抑制作用试验评估小分子之中Treg的频不下、表改型和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类控制系统性，评估Treg表改型。

结果：与有益小分子比起，来自更慢实质性体的遗忘CD4+T细胞膜的监督聚类推断，转录的遗忘CD4+ Treg频不下减低，与糖皮质激素抑制的TNFR相关特异性(GITR)表达出来减低有关。一名HbA1c升高的高血压与实质性缓更慢者和冗余的对照举例来说比起，Treg谱有所并不相同。功能控制系统性声称，与有益小分子比起，来自缓更慢实质性体的Treg介导的CD4+effectT细胞膜抑制作用明显损坏。体现为对effectCD4+T细胞膜CD25和CD134表达出来的抑制作用减低。

平面图1 深入的表改型控制系统性推断，CD4+Treg亚改型在更慢实质性队列之中减低。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标记物表达出来鉴定出10个元簇:遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg标记填充的10个元簇的MST。每个路由器都是一个战斗群(100个战斗群)，相当大的元战斗群(10个元战斗群)在路由器举例来说周围上色。每个路由器之中的年糕平面图指出单个标记的表达出来级别。(b)每个元聚类的热平面图，以推断结构上标记表达出来。(c, d)为HD举例来说(c)和SP举例来说(d)填充平面图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的基岩。(e-l)相对于丰度为每个metacluster装入之中央线平面图(丰度> 0.05%)已确定为HD和SP举例来说:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞膜(l)。橙色左上角都是捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的预测模改型证实，Treg频不下的减低是实质性缓更慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘控制系统性(g-k)比较SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的权威性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR表达出来顺利进行分离出来，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)举例来说以及小分子SP 606(橙色)之中CD25+ cd127的频不下汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控集合的装入之中央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度可视，箭头突出的簇被辨识为SP和HD队列彼此间的并不相同。(j)装入之中央线平面图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)举例来说之中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于丰度(数目)。(k)直方平面图推断每个簇的表改型(粉红色)和Treg标记相对于表达出来与背景表达出来(蓝色);上列，闪存Treg_3;下面悄悄，闪存Treg_4。背景与所有其他簇之中标记的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验

平面图3 与有益献血者比起，实质性缓更慢者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T细胞膜元簇(遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表达出来标记的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表达出来串联，推断直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon选取符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有小分子包括，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和冗余的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)串联，推断直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检验

平面图4 来自缓更慢实质性的CD4+ treg细胞膜控制effectCD4+T细胞膜的灵活性增大。SP举例来说用蓝色的之中央线和左上角指出，HD举例来说用蓝色的之中央线和左上角指出，橙色的之中央线/左上角指出小分子sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标记为CFSE, Treg按观察的数目高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培育3同月顺利进行流式细胞膜精检验。(a-d)与CD4+转发者相对于应的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE抑制作用比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用比例。用于乙改型肝炎对照(转录的响应细胞膜另有treg)计算抑制作用比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差控制系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 effectCD4+T细胞膜对缓更慢实质性的T细胞膜再造的抑制作用更敏感。SP举例来说用蓝色的之中央线和左上角指出，HD举例来说用蓝色的之中央线和左上角指出，橙色的之中央线/左上角指出小分子sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标记，treg按观察的数目高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培育3同月顺利进行流式细胞膜精(CD25反染)和细胞膜因子控制系统性。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培育。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE抑制作用百分不下(b)。(c,d) CD25抑制作用百分不下(c)和CD134抑制作用百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大之中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差控制系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自缓更慢实质性子的再造遗忘CD4+Treg在GITR表达出来之中给与了扩展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1改型肝炎几率母体之中的异质性的全面性。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28